В феврале 2011 г. Центрами по контролю и профилактике заболеваний США (CDC) были изданы рекомендации по использованию ПЦР в диагностике коклюша.
В настоящее время наблюдается тенденция к увеличению распространённости коклюша, поэтому работники практического здравоохранения всё с большей вероятностью могут столкнуться с данным заболеванием в своей повседневной работе. Авторы рекомендаций, изданных Центрами по контролю и профилактике заболеваний США (CDC) отмечают, что при соблюдении всех необходимых условий (правильная техника проведения ПЦР-диагностики, выполнение анализа в определённый временной диапазон с момента взятия образца, соблюдение техники забора материала, мероприятий по профилактике контаминации образцов, унифицированная интерпретация результатов) именно ПЦР максимально надёжно поможет в установлении правильного диагноза, тем более, что доступность ПЦР-диагностики в широкой клинической практике продолжает увеличиваться.
С помощью ПЦР в биологическом материале удаётся выявить нуклеотидные последовательности ДНК, типичные для возбудителя коклюша Bordetella pertussis. В отличие от культурального метода, ПЦР позволяет идентифицировать этиологически значимый микроорганизм даже в том случае, когда в биологическом материале имеются только мёртвые бактерии. Вместе с тем, при использовании данного высокотехнологичного метода не исключена возможность получения ложно-положительных и ложно-отрицательных результатов.
В клиническом течении коклюша выделяют катаральную, пароксизмальную стадии и стадию выздоровления.
В катаральной стадии заболевание носит субклинический характер, то есть типичные клинические проявления могут отсутствовать, и заболевание вовремя можно не распознать. Кашель присутствует, но носит перемежающий характер. Кроме того, могут наблюдаться катаральные явления, которые подчас бывает трудно отличить от типичных симптомов обычной респираторной вирусной инфекции.
Во второй стадии заболевания кашель приобретает пароксизмальный характер: типичные пароксизмы заканчиваются приступом инспираторного удушья или рвотой. Заболевание может протекать и в лёгкой форме (без характерных приступов кашля) у ранее привитых детей, подростков и взрослых. Пароксизмальные приступы кашля чаще возникают ночью, нарастают по частоте и тяжести проявлений к моменту разгара заболевания и персистируют в течение 2-6 недель.
Фаза выздоровления, характеризующаяся постепенным улучшением состояния больного, в среднем, продолжается от 7 до 10 дней (4-21 день). Приступообразный кашель становится реже и обычно исчезает в течение 2-3 недель. Однако непароксизмальный кашель может беспокоить пациента дополнительно в течение 2-6 недель, а иногда и дольше.
Невакцинированные или прошедшие неполную вакцинацию дети младше 12 месяцев имеют самый высокий риск развития тяжёлых и жизнеугрожающих осложнений, вплоть до летального исхода. У маленьких детей кашель может иметь минимальную интенсивность или даже полностью отсутствовать, при этом апное может служить единственным проявлением заболевания.
Для уменьшения вероятности ошибочного технического исполнения и неверной интерпретации результатов ПЦР, которые могут привести к ошибочному диагнозу, CDC рекомендует следующее:
- Проведение ПЦР-диагностики целесообразно только у пациентов с типичными симптомами коклюша. В отношении людей без типичной симптоматики, даже в случае тесного контакта с больным коклюшом, высока вероятность ложно-положительных результатов. Таким образом, принятие решения о проведении постэкспозиционной профилактики коклюша после подтверждённого тесного контакта с больным человеком не должно основываться на результатах ПЦР-диагностики материала, полученного от контактного лица.
- Наиболее оптимальные временные рамки проведения ПЦР-диагностики это первые три недели с момента начала кашля, поскольку по истечении данного срока количество бактериальной ДНК быстро снижается, что повышает вероятность ложно-отрицательных результатов. ПЦР-диагностика после, по меньшей мере, 5-дневного курса антибактериальной терапии также может сопровождаться ложно-отрицательными результатами. Однако реальная продолжительность возможности получения положительных результатов после назначения антибиотиков точно не установлена.
- Биологический материал для постановки ПЦР должен быть получен путём аспирации или взятия мазка с задней стенки носоглотки. Материал из носовой полости, как правило, является непригодным для проведения ПЦР-диагностики из-за неприемлемо низкого количество ДНК бактерий в данном материале.
- В процессе проведения ПЦР-диагностики необходимо максимально исключить вероятность контаминации биологического материала молекулами ДНК B. pertussis, являющихся составным компонентом некоторых вакцин. Случайное попадание молекул ДНК B. pertussis с окружающих поверхностей может также послужить причиной ложно-положительных результатов. Для профилактики перекрёстной контаминации в процессе приготовления вакцин необходимо выполнение следующих мероприятий:
- Приготовление вакцин и проведение вакцинации в местах, максимально удалённых от места забора образцов для ПЦР-диагностики.
- Забор материала должны проводиться в перчатках.
- Обязательное проведение дезинфекции с использованием 10% гипохлорита натрия.
- Использование полужидкой транспортной среды или транспортировка полученного материала в сухом состоянии без транспортной среды.
- Поскольку ПЦР-диагностика коклюша не является стандартизированной методикой в клинических лабораториях, перед проведением ПЦР-диагностики необходимо уточнить, какие именно локусы (мишени) используются в данной конкретной лаборатории. Интерпретация результатов ПЦР, особенно в образцах с высокими значениями пороговых циклов, должна быть проведена с учётом признаков и симптомов заболевания, а также доступной эпидемиологической информации.
Методы постановки ПЦР, используемые локусы (мишени), а также критерии интерпретации конечных результатов в различных лабораториях значительным образом отличаются друг от друга. Кроме того, отсутствуют унифицированные пограничные значения положительного результата. Высокие значения пороговых циклов ПЦР обычно появляются при низких уровнях амплифицированной ДНК, что может свидетельствовать о наличии инфекции, но также может быть признаком контаминации биологического материала молекулами ДНК извне во время забора материала. Поэтому чрезвычайно важным является практическое применение представленных рекомендаций с целью унифицирования подходов к проведению ПЦР-диагностики коклюша.
Best Practices for Health Care Professionals on the use of Polymerase Chain Reaction (PCR) for Diagnosing Pertussis.
Источник (PDF, 66 Kb)